隨著分子生物學(xué)技術(shù)的快速發(fā)展，以核酸雜交、核酸擴(kuò)增和核酸序列分析為代表的分子診斷和檢測技術(shù)的重要作用日益突出。樣品預(yù)處理占整個分析過程的60%，90%的檢測誤差發(fā)生在預(yù)處理環(huán)節(jié)。核酸提取是分子診斷實驗的“第一步”，也是最關(guān)鍵的一步。獲得的核酸質(zhì)量直接影響下游分子生物學(xué)實驗的成敗。

國內(nèi)二級醫(yī)院、三級醫(yī)院、疾病預(yù)防控制中心、第三方檢測等符合國家新冠肺炎檢測要求的機(jī)構(gòu)將繼續(xù)接收大量新冠肺炎檢測需求。與此同時，很多省份都出臺了政策文件，在全省范圍內(nèi)擴(kuò)建醫(yī)院，尤其是二級醫(yī)院。面對市場上各種各樣的產(chǎn)品，如何選擇一臺合適的自動核酸提取機(jī)需要仔細(xì)分析。

1.核酸提取原則

1.1

使用離心柱法的儀器

離心柱法核酸提取 instrument主要采用離心機(jī)和自動移液裝置相結(jié)合的方法。通量一般為1-12個樣本，操作時間與人工提取相差無幾，無法提高實際工作效率。而且價格昂貴，不同類型儀器的耗材不能通用，只適合資金充足的大型實驗室。

1.2

帶有磁珠法的儀器

以磁珠為載體，基于磁珠在高鹽低PH值下吸附核酸，在低鹽高PH值下與核酸分離的原理，通過移動磁珠或轉(zhuǎn)移液體即可實現(xiàn)核酸提取純化的全過程。由于其原理的獨(dú)特性，可設(shè)計成多種通量，單管或8-96個樣品即可提取，操作簡單快捷。一個批次的提取時間為9-40min(不同廠家的樣品不同)，大大提高了實驗效率，成本低，可以在不同的實驗室使用。是目前市場上的主流儀器。

磁珠法自動核酸提取儀器分為磁棒法和吸引法。

1.2.1

抽吸法

顧名思義，吸樣是通過自動移液裝置進(jìn)行的。磁鐵分為底部和側(cè)面兩種裝置。抽吸法的問題是，為了在不去除磁珠的情況下去除廢液，移液管不能離磁珠太近，以防磁珠隨廢液一起被去除。1)底部帶有磁鐵的裝置，由于磁珠被磁鐵吸附在底部，使得漂洗液無法完全去除，殘留的漂洗液中的鹽和乙醇會影響后續(xù)的洗脫效率和PCR成功率；2)側(cè)面有磁鐵的裝置會有較少的殘液，但洗脫效率也不好。要靠DNA自己溶解到洗脫緩沖液中，除非超過半小時，所以有的96自動核酸提取工作站提取一輪需要150分鐘，32磁棒法同樣時間可以提取五輪。

1.2.2

磁棒法核酸提取儀器

通常，有8、16、32和96個通量通道。磁棒只是帶走磁珠，轉(zhuǎn)移到下一步對應(yīng)的反應(yīng)孔中。此外，磁棒法提取儀器應(yīng)具有更完善的功能，如加熱，每個加熱罐應(yīng)具有獨(dú)立的溫度控制，以便設(shè)置不同的加熱、裂解和洗脫溫度。還有一點很重要，驅(qū)動磁棒的電機(jī)要能帶動磁棒快速混合攪拌液體。

磁棒法核酸提取米混合法

1)搖動混合:通過磁棒的上下振動來混合磁珠和核酸是目前市場上的主流方法。

2)旋轉(zhuǎn)混合:通過磁棒的旋轉(zhuǎn)來混合磁珠和核酸。與傳統(tǒng)的振蕩混合技術(shù)相比，氣溶膠產(chǎn)量大大減少了50%以上。交叉污染帶來的假陽性風(fēng)險得到更有效的控制，進(jìn)一步保證了實驗結(jié)果的準(zhǔn)確性。此外，旋轉(zhuǎn)混合法可以限度地保留DNA的長鏈，減少核酸的機(jī)械斷裂，提高后續(xù)檢測的靈敏度。

核酸提取試劑盒試劑及其操作步驟

買了儀器后，一定要考慮配套試劑的后續(xù)使用問題:

1)配套試劑是否齊全。不同樣品類型提取套件的產(chǎn)品鏈?zhǔn)欠裢暾?/p>

2)配套試劑是否預(yù)包裝。無包裝試劑需要實驗室工作人員用移液器添加裂解液、洗滌液、洗脫液等試劑，不減少人工操作時間；

3)除了在提取前加入樣品。需要加蛋白酶K嗎？因為有些公司還沒有掌握將蛋白酶K預(yù)包裝在裂解液中并在室溫下保存的技術(shù)，蛋白酶K需要在-20℃下單獨(dú)保存，所以需要立即添加。每個樣品多加一步蛋白酶K，K，96個樣品的作用時間增加約10~15min。

4)匹配試劑的保存溫度。有些廠家的提取試劑需要在2-8℃下運(yùn)輸和儲存。冷鏈運(yùn)輸增加了運(yùn)輸成本，儲存需要在冰箱里。然而，預(yù)包裝的提取試劑具有較大的體積，并且當(dāng)像新冠肺炎那樣大量使用時，冰箱中沒有足夠的存儲空間來存放一段時間的試劑。

5)提取后的擴(kuò)增效率。提取核酸時，觀察磁珠殘留率，檢查提取核酸的質(zhì)量！

深孔板

儀器使用的便利性

應(yīng)該考慮使用儀器的方便性。中文界面有利于學(xué)習(xí)如何使用儀器和編輯程序，減少新操作人員的誤操作和實驗失敗的風(fēng)險。

公司售后服務(wù)體系

作為醫(yī)療器械，簡單的實驗關(guān)系到診斷，甚至關(guān)系到成千上萬人的生命安全。儀器廠商的售后團(tuán)隊是購買儀器時要考慮的軟實力，強(qiáng)大、經(jīng)驗豐富的售后支持團(tuán)隊是購買儀器的重要后盾。售后團(tuán)隊需要做的是:

1)負(fù)責(zé)處理訓(xùn)練實驗中的常見問題和簡單故障；

2)負(fù)責(zé)培訓(xùn)設(shè)備的日常維護(hù)；

3)提供臨床常見PCR檢測項目的技術(shù)數(shù)據(jù)；

4)安排技術(shù)人員對全院醫(yī)務(wù)人員進(jìn)行集中科普講座；

5)接到服務(wù)電話后2小時內(nèi)響應(yīng)，形成解決方案，技術(shù)支持人員及時上門解決；