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分子實驗室如何選擇核酸提取儀?
隨著分子生物學技術的快速發展,分子診斷和檢測技術如核酸雜交、核酸擴增和核酸序列分析變得越來越重要。樣品預處理占整個分析過程的60%,90%的檢測誤差發生在預處理環節。核酸的提取是分子診斷實驗的“一步”,也是最關鍵的一步。獲得的核酸質量直接影響下游分子生物學實驗的成敗。
國內二級醫院、三級醫院、疾病預防控制中心、第三方檢測等符合國家新冠肺炎檢測要求的機構將繼續接收大量新冠肺炎檢測需求。與此同時,很多省份都出臺了政策文件,在全省范圍內擴建醫院,尤其是二級醫院。面對市場上的各種產品,如何選擇一款合適的核酸自動提取儀需要仔細分析。
1.核酸提取原理
使用離心柱法的儀器
離心柱法核酸提取儀主要采用離心機與自動移液裝置相結合的方法。通量一般為1-12個樣本,操作時間與人工提取相差無幾,無法提高實際工作效率。而且價格昂貴,不同類型的儀器耗材無法通用,只適合資金充足的大型實驗室使用。
帶有磁珠法的儀器
以磁珠為載體,利用磁珠在高鹽低pH時吸附核酸而在低鹽高PH時與核酸分離的原理,通過移動磁珠或轉移液體的方式對核酸進行全過程提取純化,由于其原理的獨特性,可以設計成多種通量,單管提取或8-96個樣品提取,操作簡單快捷。一批提取時間為9-40min(不同廠家樣品不同),大大提高了實驗效率,成本低。所以可以用在不同的實驗室,是目前市場上的主流儀器。
磁珠法自動核酸提取儀分為磁棒法和吸引法。
抽吸法
顧名思義,吸樣是通過自動移液裝置進行的。磁鐵分為底部和側面兩種裝置。抽吸法的問題是,為了在不去除磁珠的情況下去除廢液,移液管不能離磁珠太近,以防磁珠隨廢液一起被去除。1)底部有磁鐵的裝置,由于磁珠被磁鐵吸附在底部,使得漂洗液無法完全去除,殘留的漂洗液中的鹽和乙醇會影響后續的洗脫效率和PCR成功率;2)側面有磁鐵的裝置會有較少的殘液,但洗脫效率也不好。要靠DNA自己溶解到洗脫緩沖液中,除非超過半小時。所以有些96自動核酸抽取工作站抽取一發子彈需要150分鐘,同樣時間的32磁棒法可以抽取五發。
磁棒法核酸提取儀
通常,有8、16、32和96個通量通道。磁棒只是帶走磁珠,轉移到下一步對應的反應孔。此外,磁棒法的提取儀裝置應具有更完善的功能,如加熱,每個加熱罐應獨立控溫,以便設置不同的加熱、裂解和洗脫溫度。還有一點很重要,驅動磁棒的電機要能驅動。
磁棒法核酸提取儀混合法
1)搖動混合:通過磁棒的上下振動來混合磁珠和核酸是目前市面上主流的方法。
2)旋轉混合:通過磁棒的旋轉將磁珠和核酸混合。與傳統的振蕩混合技術相比,氣溶膠產量大大減少了50%以上。交叉污染帶來的假陽性風險得到更有效的控制,進一步保證了實驗結果的準確性。此外,旋轉共混法可以大限度地保留DNA的長鏈,減少核酸的機械斷裂,提高后續檢測的靈敏度。
買了儀器之后,一定要考慮以后使用配套試劑的問題:
1)匹配的試劑是否完整。不同樣品類型試劑 box產品鏈的提取是否完整?
2)配套的試劑是預包裝的。非包裝試劑需要實驗室工作人員用移液管試劑加入裂解液、洗滌液和洗脫液,不減少人工操作時間;
3)除了在提取前加入樣品。需要加蛋白酶K嗎?因為有些公司還沒有掌握將蛋白酶K預包裝在裂解液中并在室溫下保存的技術,蛋白酶K需要在-20℃下單獨保存,所以需要立即添加。每個樣品多加一步蛋白酶K,K,96個樣品的作用時間增加約10~15min。
4)匹配的保存溫度試劑。有些廠家需要在2-8℃運輸試劑,冷鏈運輸增加了運輸成本,需要在冰箱,而預包裝萃取試劑體積較大,像新冠肺炎大量使用時冰箱/kloc-5不夠一段時間。
5)提取后的擴增效率。提取核酸時觀察磁珠殘留率并檢查提取的核酸質量!
儀器使用的便利性
應該考慮使用儀器的方便性。中文界面有利于學習如何使用儀器和編輯程序,減少新操作人員的誤操作和實驗失敗的風險。
博科公司售后服務體系
正如醫療器械,簡單的實驗關系到診斷,甚至關系到成千上萬人的生命安全。儀器廠商的售后團隊是購買儀器時要考慮的軟實力,強大、經驗豐富的售后支持團隊是購買儀器的重要后盾。售后團隊需要做的是:
1)負責處理訓練實驗中的常見問題和簡單故障;
2)負責培訓設備的日常維護;
3)提供臨床常用PCR檢驗項目的技術資料;
4)安排技術人員對全院醫務人員進行集中科普講座;
5)接到服務電話后2小時內響應,形成解決方案,技術支持人員及時上門解決;
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